注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)謩e配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
人高靈敏度促甲狀腺激素（U-TSH）elisa試劑盒Anti-B4GALT1 Antibody研究領(lǐng)域  染色質(zhì)和核信號(hào) 細(xì)胞周期蛋白

人干擾素調(diào)節(jié)因子8（IRF8）elisa試劑盒Anti-B4GALT3 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 激酶和磷酸酶

人八聚體轉(zhuǎn)錄因子（OTF2A）elisa試劑盒Anti-B4GALT5 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞凋亡

人γ干擾素誘導(dǎo)單核細(xì)胞因子（MIG/CXCL9）elisa試劑盒Anti-BACH2 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞粘附分子 細(xì)胞分化

人Rho家族GTP酶1（RND1）elisa試劑盒Anti-BAG1 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 干細(xì)胞 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞粘附分子 細(xì)胞分化

人Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激酶2（Rock-2）elisa試劑盒Anti-BAG4 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) 細(xì)胞表面分子

人DNA損傷誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子4樣蛋白（DDIT4/RTP801）elisa試劑盒Anti-BAGE2 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 表觀(guān)遺傳學(xué)

人C多肽（CP）elisa試劑盒Anti-BAIAP2L1 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子

人Alpha-D 生育酚/維生素E（Alpha-D TPL）elisa試劑盒Anti-BAGE3 Antibody研究領(lǐng)域  信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞粘附分子 細(xì)胞骨架

綿羊基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B（MMP9/Gelatinase B）elisa試劑盒Anti-BAGE4 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶

雞HSP90抗體（IgG）elisa試劑盒Anti-BAIAP2L1 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 細(xì)胞膜受體

雞HSP60抗體（IgG）elisa試劑盒Anti-BAIAP2L1 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 染色質(zhì)和核信號(hào) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡 激酶和磷酸酶

大鼠肺炎病毒抗體（PV-Ab）elisa試劑盒Anti-BAIAP2L2 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡

大鼠α葡萄糖苷酶（a-Glu）elisa試劑盒Anti-BAIAP2L2 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) 染色質(zhì)和核信號(hào) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 激酶和磷酸酶

大鼠Ras相關(guān)C3肉毒素底物1（RAC1）elisa試劑盒Anti-BAK1 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 細(xì)胞凋亡

3-甲氧基-4-硝基苯酚  二苯基乙氧基膦  (五苯基)二苯基磷

鹽酸莫西沙星  (五苯基)二苯基磷  紅熒烯

N,O-1,3-二乙酰基吲哚  紅熒烯  4,4-雙(5-甲基-2-苯并唑基)二苯

3-溴苯  4,4-雙(5-甲基-2-苯并唑基)二苯  四溴對(duì)烯

3-Mercapto-1-hexal  3-巰基-1-己醇  51755-83-0

NICKEL(II) TE BASIC HYDRATE  堿式碳酸鎳  12607-70-4

Nickel(II) nitrate hexahydrate  鎳  13478-00-7

Nickel(II) acetate tetrahydrate  乙酸鎳  6018-89-9

大鼠載脂蛋白C1(APOC1)ELISA試劑盒 ，英文名： APOC1 ELISA Kit

Mouse phosphotylisital 3 kinase (PI3K) ELISA Kit 小鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA試劑盒

MouseLeptin,LEPELISAkit 小鼠瘦素(LEP)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanfibromodulin,FMODELISAKit人纖調(diào)蛋白規(guī)格：48T/96T

細(xì)胞/組織高質(zhì)純化高爾基體分離試劑盒10次

ELISAKitMMP-5大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶5規(guī)格：48T/96T
犬惡絲蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)3-Bromo-4-hydroxybenzaldehyde,97%通用試劑　5G

2-Methoxycinnamaldehyde, predominantly...通用試劑　50G

α-Bromocinnamaldehyde,98%通用試劑　25G

trans-4-Nitrocinnamaldehyde,≥97.0%通用試劑　1G

5-Bromo-2-thiophenecarboxaldehyde,95%通用試劑　5G

2,4-Dimethylbenzaldehyde,≥90%通用試劑　25G

4-(Diethylami)salicylaldehyde,98%通用試劑　5G

4-Formylbenzonitrile,95%通用試劑　5G

3-Formylbenzonitrile,98%通用試劑　1G

Ferrocenecarboxaldehyde,98%通用試劑　1G

Bicyclo[2.2.1]hept-5-ene-2-carboxaldeh...通用試劑　5G

Pyridoxal 5′-phosphate hydrate,≥98%通用試劑　1G

3,5-Dibenzyloxybenzaldehyde,98%通用試劑　1G

3-Bromobenzaldehyde,97%通用試劑　25G

4-Benzyloxybenzaldehyde,97%通用試劑　25G
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。